Técnicas

Bioquímica

• Separación de lipoproteínas por ultracentrifugación secuencial (Kontron).
• Determinación de biomarcadores sanguíneos para autoanalizador (Cobas Mira Plus): perfil lipídico, proteínas ...
• Determinación de α-tocoferol y retinol por HPLC (Hewlett Packard, 1050 con detector de UV / visible y fluorescencia).
• Cuantificación de aldehídos apolares por HPLC (Hewlett Packard, 1050 con detector de UV / visible y fluorescencia).
• Cuantificación de aldehídos totales por TLC.
• Determinación de la susceptibilidad a la oxidación de las lipoproteínas por espectrofotometría (Uvikon 922, Kontron).
• ELISAs: TNF-a, FABP4, ApoH, E-selectina, VCAM-1, ICAM-1, ox-LDL, Ab-oxLDL ...

Cultivos celulares

• Optimización y mantenimiento de cultivos primarios y líneas celulares establecidas.
• Cultivos primarios: fibroblastos, monocitos, HUVEC, haec, VSMC ...
• Líneas celulares: THP-1, HEPG2, Jurka, 3T3L1 ...
• Congelación y descongelación de células.
• Almacenamiento de células en nitrógeno líquido.
• Recuento de células con cámara de Neubauer (microscopio Olympus invertido y de contraste de fases).
• Determinación de la viabilidad celular con Trypan blue, LDH, Hoechst.
• Detección de micoplasmas en cultivos celulares por PCR.
• Tinciones celulares específicas: Oil Red, ORO ...
• Ensayo de adhesión celular.

Biologia celular

• Obtención de extractos de proteínas nucleares celulares.
• Obtención de lisats celulares.
• Determinación de proteínas por Lowry, Bradford.
• Separación de proteínas por electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE ...) y tinción con nitrato de plata, Coomassie blue (Protean II, BioRad; X Cell SureLock Mini Cell, Invitrogen; Multiphor II System, Amersham Biosciences; Hoefer SE 260 , Amersham Bioscience).
• Determinación de proteínas por western blot: XCell Blot Module (Invitrogen) Trans-Blot SD Semi-Dry Transfer Cell (BioRad).
• Inmunoprecipitación.

Biologia molecular

• Aislamiento de RNA total a partir de tejidos y células.
• Síntesis de cDNA. Transcripción inversa (RT).
• Arrays de expresión génica (en colaboración con empresa externa).
• Amplificación de ADN por PCR.
• Electroforesis en geles de poliacrilamida y tinción con nitrato de plata, Sybr-Safe.
• Electroforesis en geles de agarosa y tinción con Sybr-Safe.
• Electromobiliy shift assay (EMSA).
• Clonación de promotores en vectores.
• Mutagénesis dirigida.
• Transfeccions celulares.
• Ensayo de la luciferasa.